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植物腺苷激酶(ADK)ELISA檢測試劑盒使用說明書
更新時間:2025-02-26 點擊量:265

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

植物(Plant)腺苷激酶(ADK)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被腺苷激酶(ADK)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腺苷激酶(ADK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。

4.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  濃度為0的S0號標(biāo)準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度

4.  嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注:標(biāo)準品(S0-S5)濃度依次為:0、50、10、20、40、80 U/L

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔,標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 

4.  除空白孔外,標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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試劑盒性能

1.  準確性:標(biāo)準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:最di檢測濃度小于10 U/L。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

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實驗技術(shù)服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

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PAS糖原染色

Western Blot

免疫組化IHC染色

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阿利新藍染色

流式細胞檢測

免疫熒光染色

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探針合成

 

DNA甲基化實驗

 

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藥理毒理動物實驗

 

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明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務(wù)

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