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Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書
更新時(shí)間:2020-08-17 點(diǎn)擊量:1618

                                                                                                                    

Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒說明書

 

Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit

目錄號(hào):K0199   

保存:蛋白酶抑制劑混合物:-20℃

   其它組分:2                   - 8  度    

 

組分說明

 

Catalog no.               K0199B

Kit Size                   50 次

Nc-試劑   A                   50 ml

Nc-試劑    B                  3 ml

 

Nc-試劑   C                   25 ml

蛋白酶抑制劑混合物                       750  μl

 

 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

    Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒能夠簡(jiǎn)單、快速的提取來源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞及組織的細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白,所提取蛋白保持生物學(xué)活性。本試劑盒首先通過細(xì)胞漿蛋白抽提試劑裂解細(xì)胞膜,釋放細(xì)胞漿蛋白,然后通過離心得到細(xì)胞核沉淀。

后通過細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高,有效避免核/漿蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。

 

注意事項(xiàng)

1. 如需提取磷酸化蛋白請(qǐng)?jiān)诔樘嵩噭┲屑尤肓姿崦敢种苿?

2. 所有樣品操作請(qǐng)置于冰上進(jìn)行。

3. 可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整試劑用量,保證各試劑使用比例為                               Nc-試劑   A:Nc-試劑     B:Nc-試劑     C=100:5.5:50。

4. 可以采用更高的速度來離心。

5. 戴手套操作。                                                                                                                                                                

 

操作步驟        

l    細(xì)胞中胞漿、胞核蛋白的提取

 1.  收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。

 2.  請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕龀樘嵩噭㎞c-試劑A和Nc-試劑C進(jìn)行預(yù)冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μ抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意:在進(jìn)行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3.  1×107細(xì)胞中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                   渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育20分鐘。

    注意:各種細(xì)胞的特性不同,需要根據(jù)不同細(xì)胞的特性調(diào)整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C的用量。

 4.  加入55    μl Nc-試劑    B,渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育1分鐘。

 5.  4℃  12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(cè)(此提取液為胞漿蛋白)。

 6.  向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

 7.  4℃  12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(cè)(此提取液為胞核蛋白)。 組織中胞漿、胞核蛋白的提取

 1. 取材,保存組織。

 2. 請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕龀樘嵩噭㎞c-試劑A和Nc-試劑C進(jìn)行預(yù)冷,按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物(例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物),使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意:在進(jìn)行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3. 稱組織重量,每100 mg組織中加入1 ml Nc-試劑A(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),用勻漿器在冰上充分勻漿,

    放置在冰上孵育20分鐘。

    注意:各種組織的特性不同,需要根據(jù)不同組織調(diào)整Nc-試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少Nc-試劑A及后續(xù)Nc-試劑B、Nc-試劑C

的用量。

 4. 加入55μl Nc-試劑B,渦旋5秒以充分混勻,放置在冰上孵育                        1分鐘。

 5.  4℃12,000 rpm(13,400×g)離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(cè)(此提取液為胞漿蛋白)。

 6. 向上步所得的沉淀中加入500μl Nc-試劑C(使用前加入蛋白酶抑制劑混合物),                      渦旋5秒以充分混勻,重懸沉淀,冰上孵育40分鐘,每隔10分鐘渦旋混勻一次,每次約15-30秒。

 7.  4℃12,000 rpm離心15分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至另一離心管中,-20℃保存待測(cè)(此提取液為胞核蛋白)。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測(cè)

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

                                                                                                                       

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