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磁珠法瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒
更新時間:2020-01-19 點擊量:2712

Magbind Gel Extraction Kit

磁珠法瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

目錄號:K2515

運輸條件:室溫(15-25℃)。

保存條件:Magbeads  2-8℃,其他組分室溫。

Size

48 prep

4×96 prep

Buffer MG

45 ml

3×120 ml

Buffer MW1 (concentrate)

13 ml

2×52 ml

Buffer EB

12 ml

48 ml

Magbeads

1 ml

8×1 ml

 

本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

產(chǎn)品簡介

  本試劑盒提供了一種簡單、快速、高效的用于瓊脂糖凝膠  DNA回收的方法。它可

以從用TAE或TBE制成的瓊脂糖凝膠中回收100 bp以上的DNA片段,回收效率高達80%。

溶膠液將瓊脂糖膠溶解后,磁珠選擇性的吸附 DNA片段。經(jīng)漂洗后,洗脫得到的 DNA

純度良好,可用于測序、酶切、PCR、克隆等下游實驗。

  該試劑盒可與液體工作站或KingFisher核酸提取儀配套使用,簡單、快速的進行大

規(guī)模提取,大大降低了實驗者的工作量和實驗中的人為誤差。

 

組分說明

Time for1 sample      Time for 96 samples

Sampletype     Typical yield   DNA size      (handle)                 (BioRobot)

 Agarose Gel    Up to 80%    100 bp plus     40 min                  1-2 hour

 

實驗前準備及重要注意事項

1. Magbeads嚴禁冰凍 、離心。水凍和離心可能會對Magbeads造成不可逆的損害。

2.電泳時使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。

3.切膠時,紫外照射時間應(yīng)盡童短,以免對DNA造成損傷。

4.第---次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽說明在Buffer MW1中加入無水乙醇并做好標記。

5. Magbeads在使用前一定要渦旋震蕩2啾使其充分混勻。

6.如Buffer MG中出現(xiàn)沉淀,請在56C水浴鍋中重新溶解,搖勻后即可使用。

7.實驗步驟4、6、8和12中用Thermomixe!震蕩的目的是為使磁珠充分懸浮于溶液中,

以便使磁珠能夠充分吸附核酸,將磁珠表面的雜質(zhì)充分去除或?qū)⒑怂釓拇胖楸砻娉?/span>

分洗脫。不同廠家生產(chǎn)的Thermomixe震蕩效果不同,如1400 rpr時不能使磁珠充

分混勻,請調(diào)節(jié)震蕩頻率直至磁珠能夠充分混勻。

自備試劑

1.加熱恒溫混勻儀一建議使用 Thermo Fisher設(shè)計生產(chǎn)的Thermomixero

2.磁力架一建議使用DynaMag"M_

3.無水乙醇、75%乙醇。

 

 

操作步驟

1.在長波紫外燈照射下將目的條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡童去除多余瓊脂糖膠),

稱重后將其放入干凈的1.5 m離心管中。

2.向上-步的離心管中加入3倍膠體積的Buffer MG (如果膠塊重0.1 g, 其體積視為

100!)后,將其放入50C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩溶膠10分鐘。

注意:如無Thermomixer.可將高心管放于50仁水浴鍋或金屬浴中孵有10分鐘。期間每隔2分鐘渦旋展蕩5秒鐘。

3.將上-步的離心管從Thermomixe中取下,檢測腋塊是否*融化以及溶液是否由黃

色變成紫色(如膠塊未*溶解,繼續(xù)在Thermomixer中震蕩融解5分鐘;如溶液變

成紫色,向離心管中加入10以3 M的醋酸鈉溶液)。短暫離心后將其室溫放置5分鐘。

4.向上-步離心管中加入20以Magbeads, 渦旋震蕩5秒鐘后將其放入25C、1400 rpml

的Thermomixe中震蕩結(jié)合5分鐘。

注意: 1) 如果溶液總體積大于1ml.每增加100p!可向高心管中多加入2 y的Megbeds:如果溶

液總體積小于0.5 ml.可將Magbends的用量減少至10 以

2)如無Themomiser.可將高心管連續(xù)額倒混勻10分鐘。

5.將上- -步的離心管放于磁力架上靜置1份鐘,待Magbeads*吸附于離心管的側(cè)壁

上后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上),期間避免接觸Magbeadso

6.向離心管中加入500以Buffer MW1 (加入前檢測是否已加入無水乙醇)后,將離心

管從磁力架上取下,渦旋震蕩秒鐘后放入25C、1400 rpr的Thermomixe中震蕩3分鐘。

注意:如無Thermomixer. 可將高心管渦旋層蕩10秒鐘使Megbead流分懸浮于源洗液中。

7.將上- 步的離心管放于磁力架上靜置1份鐘,待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁上后輕

輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架

上),期間避免接觸Magbeadso

注意:棄去溶液時。如高心管董上有殘留溶液。需用移液器進一步去除。

8.向離心管中加入600 μl 75%的乙醇后,將離心管從磁力架上取下,渦旋震蕩5秒鐘后

放入25C、1400 rpm的Thermomixe中震蕩3分鐘。

注意:如無Thermomixer. 可將高心管滿旋層蕩10秒鐘使Magbeads充分懸浮于漂洗液中。

9.將上一步的離心管放于磁力架 上靜置1份鐘,待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁上后輕輕

顛倒磁力架,將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后*棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上),期間避免接觸Magbeads。

注意:棄去溶液時。如高心管蓋上有殘留溶液。需用移液暴進一步去除。

10.重復(fù)步驟8-9。

11.保持離心管固定磁力架上,用10ul移液器進一步去除離心管管底和管蓋上的溶液后室溫放置10分鐘。

12.向離心管中加入30-100 μl Buffer EB或去離子水,將離心管從磁力架上取下,渦旋

震蕩使Magbeads*懸浮于洗脫液后將其放入65℃、1400 rpm的Thermomixer中震蕩洗脫10分鐘。

注意:如無Thermomixer,可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育10分鐘,期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。

13.將上一步的離心管放置于磁力架上靜置 2分鐘,待Magbeads*吸附后用移液器

將洗脫液轉(zhuǎn)移至新的離心管中-20℃保存?zhèn)溆茫藭r可以棄去Magbeads。

 

純化回收得率的計算

  我們建議通過瓊脂糖電泳純化前后的樣品進行回收得率的計算。不建議通過260

nm處的光吸收值來計算回收得率。因為溶液中單鏈、雙鏈 DNA和dNTP以及一些純化

前的某些雜質(zhì)在260 nm處都有光吸收,這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會得到一

個假的、虛高的DNA濃度值。

 

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滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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